蛋白分離純化搞不定？請(qǐng)看這里！
“蛋白質(zhì)在組織或細(xì)胞中一般都是以復(fù)雜的混合物形式存在，每種類型的細(xì)胞都含有上千種不同的蛋白質(zhì)。蛋白質(zhì)分離純化方法已成為目前的研究熱點(diǎn)之一，而蛋白質(zhì)的分離純化工作較為復(fù)雜，需要根據(jù)不同的蛋白質(zhì)制定出相應(yīng)的策略，采用不同的方法。”
Q:蛋白質(zhì)分離純化目的
A:設(shè)法增加制品純度或比活性，對(duì)純化的要**以合理的效率、速度、收率和純度，將需要蛋白質(zhì)從細(xì)胞的全部其他成分特別是不想要的雜蛋白中分離出來，同時(shí)仍保留有這種多肽的生物學(xué)活性和化學(xué)完整性。
蛋白質(zhì)分離純化方法有哪些？
1、 鹽析
實(shí)驗(yàn)原理：中和蛋白質(zhì)表面電荷并破壞水化膜。
蛋白質(zhì)易溶于水，因?yàn)槠浞肿拥?COOH -NH2和-OH都是親水基團(tuán)，這些基團(tuán)與極性水分子相互作用形成水化層，包圍于蛋白質(zhì)分子周圍形成1~100 nm大小的親水膠體，從而削弱了蛋白質(zhì)分子之間的作用力。當(dāng)大量鹽加到蛋白質(zhì)溶液中，高濃度的鹽離子(如硫酸銨的 SO42- 和NH4+)有很強(qiáng)的水化力，可奪取蛋白質(zhì)分子的水化層，使之"失水"，于是蛋白質(zhì)膠粒凝結(jié)并沉淀析出。
2、等電點(diǎn)沉淀法
實(shí)驗(yàn)原理：利用蛋白質(zhì)在等電點(diǎn)時(shí)溶解度*低而各種蛋白質(zhì)又具有不同等電點(diǎn)的特點(diǎn)進(jìn)行分離的方法。
在等電點(diǎn)時(shí)，蛋白質(zhì)分子以兩性離子形式存在，其分子凈電荷為零(即正負(fù)電荷相等)，此時(shí)蛋白質(zhì)分子顆粒在溶液中因沒有相同電荷的相互排斥，分子相互之間的作用力減弱，其顆粒極易碰撞、凝聚而產(chǎn)生沉淀，所以蛋白質(zhì)在等電點(diǎn)時(shí)，其溶解度*小，*易形成沉淀物。
注意點(diǎn)：不同的蛋白質(zhì)，具有不同的等電點(diǎn)。同一種蛋白質(zhì)在不同條件下，等電點(diǎn)不同。
3、有機(jī)溶劑沉淀法
實(shí)驗(yàn)原理：加入有機(jī)溶劑使水溶液的介電常數(shù)降低，因而增加了兩個(gè)相反電荷基團(tuán)之間的吸引力，促進(jìn)了蛋白質(zhì)分子的聚集和沉淀。
有機(jī)溶劑引起蛋白質(zhì)沉淀的另一種解釋認(rèn)為與鹽析相似，有機(jī)溶劑與蛋白質(zhì)爭(zhēng)奪水化水，致使蛋白質(zhì)脫除水化膜，而易于聚集形成沉淀。
影響因素：(1)有機(jī)溶劑的選擇 (2)溫度的控制 (3)pH值 (4)離子強(qiáng)度
用此法析出的沉淀一般比鹽析法易過濾或離心沉降，分離后的蛋白質(zhì)沉淀應(yīng)立即用水或者緩沖液溶解，以達(dá)到降低有機(jī)溶劑的濃度的目的。此法在血液制品的制備過程中較多使用。
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